VISUALIZACIÓN DE CÉLULAS SANGUÍNEAS Y EXTRACCIÓN DE PLASMA

Martes, 28 de Septiembre de 2021

OBJETIVO

1.- Visualizar e identificar diferentes células sanguíneas en extensiones en fresco y teñidas, y apreciar la diferencia en la visualización.

2.- Obtener plasma a partir de sangre periférica para futuras prácticas.

FUNDAMENTO

La sangre se compone de elementos formes (parte sólida) y plasma (parte líquida). Ambos componentes se pueden separar mediante centrifugación de sangre anticoagulada in vitro.

Dado que las células no tienen suficiente contraste para ser visualizadas directamente con el microscopio, deben ser teñidas para permitir distinguir los tipos celulares presentes en la muestra.

MUESTRAS, REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPOS

MUESTRAS

Sangre

MATERIAL

Portaobjetos y cubreobjetos
Pipeta graduada 5 ml
Auxiliar de pipeteo
Pipeta Pasteur plástico
Pipeta Pasteur vidrio y auxiliar de pipeteo
Gradilla
Tubo para centrífuga
Parafilm
Tubo de ensayo
Microtubo Eppendorf
Rotulador permanente
Portaobjetos con extensión teñida

EQUIPOS

Microscopio óptico
Centrífuga

PROCEDIMIENTO

1.- Conectar el microscopio óptico y la centrífuga 30 minutos antes de empezar la práctica.

2.- Preparar el material en la mesa de trabajo.

3.- Homogeneizar el tubo de sangre.

4.- Pipetear 4 ml de sangre con la pipeta graduada y depositarlos en el tubo de ensayo previamente rotulado.

VISUALIZACIÓN DE CÉLULAS SANGUÍNEAS

1.- Con la pipeta Pasteur de plástico depositar un gota de sangre sobre el portaobjetos y cubrirlo con el cubreobjetos de forma que no queden burbujas de aire.

2.- Visualizar al microscopio óptico empezando por el objetivo 4x, seguido del 10x y 40x.

3.- Anotar resultados.

SEPARACIÓN DE SANGRE EN FASES POR CENTRIFUGACIÓN:

1.- Pipetear 3 ml de sangre con la pipeta graduada, depositarlos en el tubo de centrífuga previamente rotulado y tapar con parafilm.

2.- Centrifugar la muestra a 1500 rpm durante 30 minutos. Transcurrido este tiempo sacar el tubo de la centrífuga y observar la separación de fases.

OBTENCIÓN DE PLASMA SANGUÍNEO:

1.- Volver a centrifugar la muestra, esta vez a 2500 rpm durante 5 minutos (obtención de plasma sanguíneo).

2.- Con la pipeta Pasteur de vidrio tomar el plasma sanguíneo y depositarlo en el microtubo Eppendorf, previamente rotulado con el nombre y la fecha (dejamos un poco en el tubo de centrífuga para no coger elementos formes del fondo).

3.- Colocar el microtubo con el plasma en una gradilla y guardarlo en el congelador.

OBSERVACIÓN DE PREPARACIONES TEÑIDAS:

1.- Visualizar al microscopio óptico la extensión de sangre periférica teñida empezando por el objetivo 4x, seguido del 10x y 40x.

2.- Anotar resultados.

RESULTADOS

Las fases se han separado bien al centrifugar. El plasma obtenido es de color rojo (posible hemólisis).

En el portaobjetos con sangre en fresco se aprecian los eritrocitos sin color, pero no se diferencia ningún otro tipo de célula. Es en el portaobjetos que contiene la sangre teñida donde reconocemos diferentes tipos de células como linfocitos, monocitos y neutrófilos.

OBSERVACIONES

Nuestro plasma ha quedado un poco más coloreado que el de algunos compañeros, posiblemente porque haya habido hemólisis. Al pipetear el plasma sanguíneo con la pipeta de vidrio hemos cogido algunos elementos formes del fondo y al soltarlos se ha enturbiado un poco el plasma.

El objetivo de 100x del microscopio estaba manchado y entorpecía la visualización de las células.

IMÁGENES