PRÁCTICA 07: CUANTIFICACIÓN DE HEMOGLOBINA A2 Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HIERRO
Técnicas de análisis hematológico Naomi Barrios Parra
CUANTIFICACIÓN DE HEMOGLOBINA A2 Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HIERRO
Martes, 14 de Diciembre de 2021
OBJETIVO
Determinar el porcentaje de hemoglobina A2 utilizando una microcolumna de intercambio iónico.
FUNDAMENTO
Se basa en la unión electrostática reversible de las hemoglobinas, que tiene carga negativa, a una resina que tiene carga positiva.
La fuerza de unión de cada tipo de hemoglobina a la resina varía, según su carga neta. La unión más débil es la de la Hb A2, de manera que al lavar la columna con una solución o un tampón de baja fuerza iónica se separa de los grupos funcionales y eluye a un tubo colector, mientras que las demás hemoglobinas quedan retenidas en la columna.
La cuantificación de Hb A2 es de gran utilidad en el diagnóstico de talasemias. Valores elevados se consideran prueba suficiente para diagnosticar el rasgo beta-talasémico.
MUESTRAS, REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPOS
MUESTRAS
Sangre total
MATERIAL
Microcolumnas
Gradilla
Pipeta graduada 5 ml y 10 ml
Micropipeta y puntas
Cubeta de espectrofotometría
Tubos ensayo
EQUIPOS
Espectrofotómetro
PROCEDIMIENTO
1.- Preparar la columna de intercambio iónico: Resuspender la resina por inversión, dejando eluir el tampón de conservación y colocándola en un soporte sobre un tubo colector.
2.- Cargar la columna con el hemolizado problema y dejar que se absorba sin aplicar ningún tipo de presión.
3.- Añadir tampón de elución a la columna, en un volumen adecuado.
4.- Recoger el eluido (que contiene la Hb A2) En el tubo colector y enrasar a un volumen determinado para poder hacer los cálculos.
5.- Leer la absorbancia (415 nm).
CÁLCULOS
% Hb A2 = (Abs. Hb A2Abs / Hb Total) x 25
RESULTADOS
Absorbancia Hb total = 0,0406
Absorbancia Hb A2 = 0,045
(0,0450 /,406) x 25 = 2,77 % Hb A2
OBSERVACIONES
El eluyente salía hemolizado, por lo que los resultados no serán fiables.
IMÁGENES
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