PRÁCTICA 08: DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE PROTROMBINA DE FORMA MANUAL Y AUTOMÁTICA

 Técnicas de análisis hematológico                                                                          Naomi Barrios Parra

PRÁCTICA 08

DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE PROTROMBINA DE FORMA MANUAL Y AUTOMÁTICA

Martes, 25 de Enero de 2022

Martes, 01 de Febrero de 2022

OBJETIVO

Valorar la hemostasia secundaria mediante la prueba del tiempo de protrombina (TP).

Determinar el tiempo que tarda en formarse el coágulo mediante el uso de tromboplastina cálcica, y comparar los métodos manual y automático.

FUNDAMENTO

La prueba consiste en activar la vía extrínseca de la coagulación mediante un reactivo denominado tromboplastina cálcica, que contiene factor tisular (activa el factor VII), fosfolípidos y cloruro cálcico (necesarios en varios pasos de la vía) y medir el tiempo que tarda en formarse el coágulo de fibrina.

El TP valora globalmente el funcionamiento de la vía extrínseca de la coagulación. Estudia los factores V, VII y X, y en menor medida, el factor II (protrombina). En consecuencia, el TP se alargará en casos de:

• Deficiencias congénitas de los factores implicados.

• Deficiencia factorial adquirida (útil en estudio de la insuficiencia hepática).

• Coagulación intravascular diseminada (CID)

• Control para la terapia con fármacos antivitamina K.

VALORES NORMALES INR	VALORES NORMALES INP
2-3,5	0,8-1,2

 

MUESTRAS, REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPOS

• MUESTRAS

• Plasma

• REACTIVOS

• Tromboplastina cálcica

• MATERIAL

• Micropipeta y puntas

• Cubetas para coagulómetro

• Vaso desechos (agua + lejía)

• EQUIPOS

• Baño termostático a 37ºC

• Coagulómetro

• Cronómetro

PROCEDIMIENTO

MÉTODO MANUAL (POR DUPLICADO)

1.- Pipetear 0,1 ml de plasma en un tubo de hemólisis e incubarlo en el baño a 37ºC durante 2 minutos.

2.- Añadir 0,2 ml de reactivo (tromboplastina cálcica) precalentado a 37ºC (debe estar precalentado de 5-30 minutos antes de su uso). Simultáneamente poner en marcha el cronómetro.

3.- Realizar la técnica manual del tubo inclinado (dentro del baño termostático):

• Mezclar agitando el tubo de manera rápida y controlada 1-2 segundos.

• Mantener el tubo dentro del baño hasta que falten 3-5 segundos para el tiempo normal de coagulación de la prueba que se esté realizando.

• Coger el tubo por la parte superior e iniciar un movimiento de vaivén, con una frecuencia de una inclinación por segundo (dentro del baño).

• Visualizar atentamente para detectar cuándo se produce el coágulo de fibrina.

4.- Parar el cronómetro al detectar la formación del coágulo de fibrina y registrar el tiempo de coagulación.

5.-  Repetir la prueba con otro tubo.

6.- Anotar los dos resultados (en segundos). Los tiempos de coagulación duplicados no deben diferir entre sí en más del 10%.

MÉTODO AUTOMÁTICO

1.- Encender el coagulómetro y seleccionar TP (tiempo protrombina).

2.- Añadimos 50 µl de muestra y depositarlas en la cubeta para el coagulómetro. Introducir la cubeta en el pocillo del coagulómetro que pone “optic”.

3.- Añadir 50 µl de reactivo a otra cubeta e introducirla en uno de los pocillos que quedan vacíos (cualquiera). Seleccionar “optic” Para que detecte las muestras.

4.- Esperar a que se atemperen las muestras.

5.- Añadir el reactivo a la muestra con una micropipeta sin mover el pocillo.

6.- Esperar a que el coagulómetro detecte el coágulo y nos de el tiempo de protrombina.

CÁLCULOS

INP = TP Plasma problema / TP Plasma control 

Plasma control = 118,80

Cálculo INR para control de tratamientos con anticoagulantes:

INR = (TP Plasma problema / TP Plasma control) = resultado se eleva por el valor ISI 

(ISI: índice de sensibilidad internacional. nos lo da el fabricante)

(Método manual)

(Tiempo tubo 1 + tiempo tubo 2) / 2

RESULTADOS

MÉTODO MANUAL (POR DUPLICADO)

Tubo 1	Tubo 2
38 segundos	41 segundos

(38 + 41) / 2 = 39, 5 segundos

39,5 / 118,80 = 0,33 (Se encuentra por debajo de los valores normales)

MÉTODO AUTOMÁTICO

Resultado coagulómetro: 79, 7 segundos

INP = 79, 7 / 118,80 = 0,67 (Se encuentra por debajo de los valores normales)

INR = 0,67 (elevado al ISI) = 0, 53 (Se encuentra por debajo de los valores normales)

OBSERVACIONES

El método automático es mucho más cómodo, rápido, fácil y limpio que el manual. Muchas muestras han dado valores inferiores a los normales.

IMÁGENES

Imagen 01 Coagulómetro	Imagen 02. Tromboplastina Cálcica
Imagen 03. Tromboplastina Cálcica	Imagen 04. Coágulo (método manual)